Il nuovo fluorocromo DyLight 405 coniugato agli anticorpi secondari viene eccitato a 400 nm ed emette fluorescenza con un picco attorno ai 421 nm (fig 1).
Fig 1. Spettro di eccitazione (violetto) ed emissione (blu) per gli anticorpi secondari Jackson ImmunoResearch coniugati con DyLight 405. Il confronto quantitativo non può essere fatto dato che le altezze dei picchi sono state normalizzate. Gli spettri sono ottenuti con lo spettrofluorimetro della serie M della Photon Technology International, Inc.
Questi fluorocromi sono molto luminosi e fotostabili quando osservati con il microscopio confocale equipaggiato con un laser a 405 nm ed un appropriato filtro di emissione (fig 2).
Fig 2. Tessuto di retina di topo colorato con DyLight 405-donkey anti rabbit IgG (JIR) con rabbit anti GFAP (DAKO), DyLight 488-donkey anti mouse IgG (JIR) con mouse anti-neurofilament (Abcam), Cy3-donkey anti chicken IgG (JIR) con chicken anti vimentin (Chemicon), e DyLight 649-donkey anti goat IgG (JIR) con goat anti collagen IV (Chemicon). Le sezioni sono state montate in n-propylgallate-glycerol per l'acquisizione con Olympus Flouview 1000 Laser Scanning microscopio confocale equipaggiato con laser a 405 nm e laser a krypton/argon. Immagine di Gabe Luna,Neuroscience Research Institute, UC Santa Barbara.
A queste condizioni è possibile ottenere una immagine effettiva di 4 colori con una buona separazione colorimetrica, una buona fotostabilità, ed elevata sensibilità in entrambi i mounting media, acquoso o permanente.
La combinazione dei DyLight 405, DyLight 488, Rhodamine Red-X e DyLight 649 fornisce la massima separazione dei colori (fig 3).
Fig 3. Spettro di emissione dei DyLight 405 (blu), DyLight 488 (verde), Rhodamine Red-X (rosso) e DyLight 649 (marrone). Questa immagine mostra le relative forme e posizioni di ciascun picco di emissione di ogni fluoroforo. La figura mostra i 4 colori effettivi che si possono ottenere con la massima separazione dei colori utilizzando queste sonde. Il confronto quantitativo non può essere fatto dato che le altezze dei picchi sono state normalizzate. Tutti gli spettri sono stati ottenuti con lo spettrofluorimetro della serie M della Photon Technology International, Inc.
L'uso del DyLight 405 non è raccomandato nella microscopia ad epifluorescenza e nella citofluorimetria, in quanto i filtri di emissione utilizzati non sono ottimali per questo fluorocromo.
La seguente lista di prodotti: anticorpi secondari purificati per affinità, streptavidina ed immunoglobuline di controllo coniugati con il DyLight 405 sono offerti da Jackson ImmunoResearch per il solo uso in protocolli di multimarcatura a 4 colori, utilizzando il microscopio confocale, equipaggiato di laser a 405 nm.
Product Description
NEW DyLight405 A=400, E=421
Streptavidin
1.0 mg
016-470-084
Donkey Anti-Chicken IgY†(IgG)(H+L) (min X Bov, Gt, GP, Sy Hms, Hrs, Hu, Ms, Rb, Rat, Shp Sr Prot) ML*
0.5 mg
703-475-155
Donkey Anti-Goat IgG (H+L)♦ (min X Ck, GP, Sy Hms, Hrs, Hu, Ms, Rb, Rat Sr Prot) ML*
0.5 mg
705-475-147
Donkey Anti-Guinea Pig IgG (H+L)
(min X Bov, Ck, Gt, Sy Hms, Hrs, Hu, Ms, Rb, Rat, Shp Sr Prot)ML*
0.5 mg
706-475-148
Donkey Anti-Human IgG (H+L)
(min X Bov, Ck, Gt, GP, Sy Hms, Hrs, Ms, Rb, Rat, Shp Sr Prot)ML*
0.5 mg
709-475-149
Donkey Anti-Mouse IgG (H+L)
(min X Bov, Ck, Gt, GP, Sy Hms, Hrs, Hu, Rb, Shp Sr Prot)ML*
0.5 mg
715-475-150
Donkey Anti-Mouse IgG (H+L)
(min X Bov, Ck, Gt, GP, Sy Hms, Hrs, Hu, Rb, Rat Shp Sr Prot)**ML*
0.5 mg
715-475-151
Goat Anti-Mouse IgG, Fcγ Subclass 1 Specific (min X Hu, Bov, Rb Sr Prot)ML*
0.5 mg
115-475-205
Goat Anti-Mouse IgG, Fcγ Subclass 2a Specific (min X Hu, Bov, Rb Sr Prot)ML*
0.5 mg
115-475-206
Goat Anti-Mouse IgG, Fcγ Subclass 2b Specific (min X Hu, Bov, Rb Sr Prot)ML*
0.5 mg
115-475-207
Goat Anti-Mouse IgG, Fcγ Subclass 2c Specific (min X Hu, Bov, Rb Sr Prot)ML*
0.5 mg
115-475-208
Goat Anti-Mouse IgG, Fcγ Subclass 3 Specific (min X Hu, Bov, Rb Sr Prot)ML*
0.5 mg
115-475-209
Goat Anti-Mouse IgG (H+L) (min X Rat, Hu, Bov, Rb Sr Prot) ML*
0.5 mg
115-475-166
Donkey Anti-Rat IgG (H+L)
(min X Bov, Ck, Gt, GP, Sy Hms, Hrs, Hu, Rb, Shp Sr Prot)ML*
0.5 mg
712-475-150
Donkey Anti-Rat IgG (H+L)**
(min X Bov, Ck, Gt, GP, Sy Hms, Hrs, Hu, Ms, Rb, Shp Sr Prot)ML*
0.5 mg
712-475-153
Goat Anti-Rat IgG (H+L) (min X Ms, Hu, Bov, Rb Sr Prot) ML*
0.5 mg
112-475-167
Donkey Anti-Rabbit IgG (H+L)
(min X Bov, Ck, Gt, GP, Sy Hms, Hrs, Hu, Ms, Rat, Shp Sr Prot) ML*
0.5 mg
711-475-152
Goat Anti-Rabbit IgG (H+L)
(min X Hu, Ms, Rat Sr Prot)ML*
1.5 mg
111-475-144
Donkey Anti-Sheep IgG (H+L)♦
(min X Ck, GP, Sy Hms, Hrs, Hu, Ms, Rb, Rat Sr Prot)ML*
0.5 mg
713-475-147
ChromPure Donkey IgG, whole molecule
1.0 mg
017-470-003
ChromPure Goat IgG, whole molecule
1.0 mg
005-470-003
*
ML= Multiple Labeling
†
IgY is the original designation for the IgG-like protein found in both serum and egg yolk.
♦
Warning: BSA and dry milk may contain IgG which will react with this antibody. Use of BSA and/or dry milk to block or dilute this antibody may increase background and/or reduce secondary antibody titer.
